近日，武漢，檢測人員在對采集來的樣本進(jìn)行標(biāo)本信息核對。新華社記者 程敏攝
在廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室標(biāo)本處理間內(nèi)，研究人員正進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。受訪者供圖
核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細(xì)活，容不得半點馬虎。
“這里是與病毒‘零距離’接觸的地方，整個實驗室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，我們喜歡用‘三流’來形容它，即人流、物流、氣流的單向流動，確保在里面的污染物不會泄漏到外面而造成污染。”廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室主任林劍國說。而他說的“這里”指的就是P3實驗室（生物安全防護(hù)三級實驗室）。廣東省第二人民醫(yī)院每天400多份新冠病毒核酸檢測就是在這里開展的。
現(xiàn)在，讓我們揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室的神秘面紗，看看在這里病毒究竟是怎樣被“揪出來”的？
檢測流程每個環(huán)節(jié)都是精細(xì)活
核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細(xì)活，容不得半點馬虎。
實驗室內(nèi)的檢測流程可分為5個步驟：樣本進(jìn)入“傳遞窗”—滅活處理—開蓋加樣和核酸提取—擴增反應(yīng)判斷結(jié)果—高壓滅菌。
第一步，采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進(jìn)入P3實驗室前就得先進(jìn)入一個特殊的窗口——“傳遞窗”，這個窗口也叫Air Lock，空氣鎖，顧名思義，與空氣有關(guān)。這個傳遞窗有不能同時打開的雙重門，保證傳遞樣本時帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門中，確保實驗室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本從這里開啟了其在實驗室中短暫的一生。
第二步，樣本在水浴箱經(jīng)半個小時56℃的高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使實驗員在對樣本進(jìn)行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步，進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。
第四步，提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi)，就要上儀器了。提取的核酸加入擴增試劑中，通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點進(jìn)行擴增，利用不同的溫度進(jìn)行變性、退火和延伸，每個循環(huán)采集熒光值，45個循環(huán)后繪制熒光曲線，用時約110分鐘，實驗員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽性。
第五步，實驗過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理。“物流”在這里就結(jié)束了。
檢測結(jié)果經(jīng)歷重重比對與復(fù)核
任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致檢測結(jié)果差錯。因此，為保障檢測的質(zhì)量，檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對與復(fù)核。
據(jù)介紹，檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開始了，樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核才能上崗，樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān)，每個動作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行，樣本采集完成后的護(hù)送工作也需按照嚴(yán)密的程序，由專人專道配送到實驗室。
在檢測過程中，實驗員始終保持謹(jǐn)慎的態(tài)度進(jìn)行每一次測試，不錯過任何一個可疑樣本，針對可疑樣本，還會選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定；其次，按照流程，每進(jìn)行一批實驗，均會隨機插入三個以上空白對照，針對陽性樣本還會進(jìn)行病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”的出現(xiàn)。
檢測后，實驗室還會定期隨機抽取檢測樣本送到第三方實驗室進(jìn)行檢測，對數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析，同時實驗室也會參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評，保障檢測的準(zhǔn)確性。
病毒“偵察兵”業(yè)務(wù)過硬又英勇
在操作中，實驗員面對眼前的樣本，需要“一個一個地揭開蓋子，進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。核酸檢測的宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是實驗員的安全。
因此實驗員要進(jìn)入P3實驗室，首先應(yīng)在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級防護(hù)服，通過緩沖間進(jìn)入實驗室負(fù)壓工作間，在這里進(jìn)行標(biāo)本處理，核酸提取及檢測，完畢后進(jìn)行空間、表面消毒，再按順序脫下防護(hù)服，通過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟必須嚴(yán)格執(zhí)行，一個都不能少。
廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室檢測團(tuán)隊目前有21人，實行一天三班制。在疫情暴發(fā)階段，為了滿足檢測需求，縮短檢測時間，實驗室又在原有團(tuán)隊基礎(chǔ)上，從風(fēng)濕免疫科、血液科等科室的實驗室調(diào)配了人員。這些病毒“偵察兵”70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過分子生物學(xué)的培訓(xùn)，并擁有多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）上崗證。
實驗室嚴(yán)格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實驗室負(fù)壓密閉的空間里穿著三級防護(hù)裝備，5個小時不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的問題，隨時需要面對因負(fù)壓差及裝備嚴(yán)密導(dǎo)致的頭暈、嘔吐等癥狀。
“與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護(hù)人員不同，他們藏在實驗室里，每天與病毒近距離接觸，是人們看不見的‘最前線’。”林劍國說。
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生物安全防護(hù)實驗室分幾級
生物安全防護(hù)實驗室是指實驗室的結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備能夠確保工作人員在處理含有致病微生物及其毒素時，不受實驗對象侵染，并保證周圍環(huán)境不受污染。
根據(jù)所處理微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護(hù)實驗室分為四級，一級最低，四級最高。生物安全防護(hù)一級實驗室一般適用于對健康成年人無致病作用的微生物；二級適用于對人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；三級適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四級適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。
20世紀(jì)80年代，為了研究流行性出血熱病毒的傳播機制，我國修建了第一個P3實驗室。2003年暴發(fā)的SARS疫情，是我國高等級生物安全實驗室發(fā)展的一個分水嶺。SARS暴發(fā)后，我國發(fā)布了國家生物安全實驗室建設(shè)體系規(guī)劃。一批P3實驗室投入運行，并建成了P4實驗室。
2015年1月31日，我國首個P4實驗室、中科院武漢國家生物安全實驗室在武漢竣工。2018年1月4日，實驗室通過國家衛(wèi)計委（現(xiàn)國家衛(wèi)健委）高致病性病原微生物實驗活動現(xiàn)場評估，成為我國乃至亞洲首個正式投入運行的P4實驗室。
當(dāng)前，全球的P4實驗室建設(shè)正呈現(xiàn)超速發(fā)展的趨勢。這與全球化時代的烈性傳染病危險有關(guān)，也與國家生物安全戰(zhàn)略有關(guān)。據(jù)不完全統(tǒng)計，全球已知有22個國家和地區(qū)的60個機構(gòu)擁有P4實驗室。但由于P4實驗室相關(guān)內(nèi)容涉及國家生物安全核心機密，所以一些國家并未公開數(shù)據(jù)。
經(jīng)過這些年的發(fā)展，目前我國已有幾十家P3、P4實驗室，為我國烈性與重大傳染病防控、生物防范和產(chǎn)業(yè)發(fā)展作出了重要貢獻(xiàn)。（記者 龍躍梅 通訊員 陳淑華 王 蒙）
