ELISA的基本原理

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）顧名思義就是以酶作為符號(hào)指示物、以抗原抗體免疫反響為基礎(chǔ)的固相吸附測(cè)定辦法。因而，一個(gè)ELISA測(cè)定試劑，其有機(jī)組成部分包含三個(gè)方面，即固相支持物及包被的抗原或抗體、酶符號(hào)的抗體或抗原和酶反響底物等。抗原或抗體的固相化并不影響其免疫結(jié)合活性，酶符號(hào)的抗體或抗原亦是如此，而且符號(hào)酶的活性不因符號(hào)進(jìn)程而損失。整個(gè)測(cè)定中，抗原抗體結(jié)合反響在固相支持物上進(jìn)行，反響結(jié)果的判斷以酶與其底物效果后的顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光反響為準(zhǔn)則，顯色或產(chǎn)生熒光或發(fā)光的強(qiáng)度與臨床標(biāo)本中待測(cè)物的濃度成正比或反比。目前國(guó)內(nèi)的ELISA試劑盒均以酶的顯色反響來(lái)完結(jié)測(cè)定。

反響體積
此處的反響體積并非是微孔中的液體體積，而是固相免疫測(cè)定中與固相包被的抗體或抗原有觸摸的部分，這部分體積到底有多少，很難測(cè)定，但比反響管中總液體體積要少得多。固相抗原抗體反響發(fā)生于液體—固相界面，可能處于一級(jí)結(jié)合鍵的引力距離內(nèi)，小于10nm。液相中待測(cè)抗原或抗體要進(jìn)入到這個(gè)結(jié)合界面，需求分散或質(zhì)量搬運(yùn)。微顆粒的反響外表區(qū)域較微孑L要大得多，因而處于抗原抗體結(jié)合界面的體積占總反響體積的比例亦高得多。因而，結(jié)合反響的效率更高。這也是全自動(dòng)化免疫測(cè)定分析儀均選用微顆粒固相的重要原因之一。

微孔內(nèi)特異抗體的免疫測(cè)定  
運(yùn)用吸附的雜亂抗原進(jìn)行微孔內(nèi)特異抗體的免疫測(cè)定，與液相測(cè)定相比，有明顯的親和力依賴性，固相受體—配體相互效果的穩(wěn)定性好像與微孔內(nèi)特異抗體的免疫測(cè)定親和力依賴性和極低比例的所捕獲的總抗體相對(duì)立

固相上抗原抗體相互效果的免疫化學(xué)

固相上抗原抗體結(jié)合反響所需求的時(shí)刻一般，固相免疫測(cè)定如ELISA中抗原抗體結(jié)合到達(dá)平衡所需求的時(shí)刻，要大于液相免疫測(cè)定，并隨液體所占體積與界面抗體或抗原受體所占體積比的添加而添加。當(dāng)在微孑L板孔內(nèi)進(jìn)行免疫測(cè)守時(shí)，界面反響動(dòng)力學(xué)顯示其對(duì)分散效果有很強(qiáng)的依賴性，分散性越強(qiáng)則反響所需時(shí)刻越短，結(jié)合越充沛。這一點(diǎn)可經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)振動(dòng)來(lái)到達(dá)，微孔的旋轉(zhuǎn)振動(dòng)可促進(jìn)液體進(jìn)入到可與抗體或抗原包被界面觸摸的較小的區(qū)域內(nèi)。也可在微孔中放一個(gè)慵懶的塞子以使反響液體成為一個(gè)小體積，或運(yùn)用一個(gè)具有大外表的多孔的基質(zhì)如硝酸纖維素，或運(yùn)用微顆粒來(lái)做到這一點(diǎn)。